LICA : Laboratoire d’Ingénierie Cellulaire de l’Arbre

Site d'Orléans : INRAE - Centre Val de Loire - 2163, Avenue de la pomme de pin - CS 4001 Ardon - 45075 Orléans Cedex 2

 https://www6.inrae.fr/lica

Le LICA est un plateau technique inauguré en 2017 sur le site d’Orléans du Centre INRAE Val de Loire. Il est destiné à abriter dans un même lieu des études (pendant toute leur durée de réalisation) impliquant la production et la caractérisation d’arbres génétiquement modifiés ou édités. C’est un bâtiment confiné de type L2S2 respectant les réglementations en matière de sécurité biologique. Ainsi, le LICA a pour vocation de répondre aux besoins en recherches, en formation et en services des équipes de recherche publiques ou privées mettant en jeu la production, la multiplication et la caractérisation de ressources forestières génétiquement modifiées à des fins expérimentales et visant à augmenter notre savoir sur la physiologie des arbres forestiers et leurs capacités d’adaptation à différentes contraintes environnementales.  

Le LICA réunit l’expertise de Chercheurs, Ingénieurs et Techniciens et des équipements de l’UMR Biologie intégrée pour la valorisation de la diversité des Arbres et de la Forêt (BioForA) et l’UE Génétique et Biomasse Forestière d’ORléans (GBFOR) de INRAE.

Le LICA est doté d’une Charte d’Utilisation et les services proposés sont consultables sur son site web (https://www6.inrae.fr/lica/Demande-de-Collaboration).

Les activités développées au LICA concernent principalement :

• La multiplication et l’élevage d’arbres forestiers issus de culture in vitro. Cette activité bénéficie de laboratoires, chambres de cultures in vitro et serres automatisées.
• La transformation génétique par coculture d’Agrobacteries pour réaliser des études de génomique fonctionnelle principalement chez le peuplier, espèce modèle pour les arbres forestiers. Les techniques proposées permettent l’expression ectopique, la réduction d’expression (par interférence d’ARN) et le KO (par édition du génome) du ou des gènes ciblés.
• Les techniques de base en biologie moléculaire pour sélectionner les évènements les plus prometteurs sur des arbres élevés en conditions contrôlées.
• Les techniques de phénotypage pour évaluer les effets de la modification de l’expression des gènes cibles. Le LICA est particulièrement bien équipé pour réaliser du microphénotypage, notamment au niveau du bois, tissu emblématique des arbres, grâce à ses équipements et compétences en histologie (stéréomicroscopie en fluorescence, microscopie en fluorescence, microcopie confocale laser, …) et imagerie moléculaire (immunolocalisations, hybridation in situ, microspectroscopie infra-rouge).

Une équipe support de 4 personnels permanents, aidés par des CDD, assure le bon fonctionnement du LICA et l’encadrement pour la réalisation des différents projets et développements technologiques menés dans l’infrastructure. Le LICA est adossée à une équipe scientifique de BioForA, experte en génomique fonctionnelle de la formation du bois. La gouvernance est assurée par le Conseil scientifique du LICA (6 membres dont 3 extérieurs).

Les services du LICA sont ouverts à tous les acteurs de la recherche publique ou privée. Toute question ou demande de collaborations ou d’accès aux équipements et services proposés par le LICA doivent être adressées à Gilles Pilate. Les conditions d’accès sont décrites dans la Charte d’Utilisation et sur le site Web du LICA. Pour le montage, la mise en œuvre et la conduite des projets des utilisateurs, le LICA s’engage à :

• Proposer une formation / un encadrement par des personnels compétents.
• Proposer des installations et des équipements performants et opérationnels.
• Mettre à disposition les techniques associées à ces matériels.
• Informer régulièrement les utilisateurs de l’état d’avancement de leur projet.
• Restituer les résultats d’expérimentations dès que disponibles.
• Respecter la confidentialité sur la nature et les résultats des projets réalisés.

Après instruction par le Comité Scientifique des demandes déposées concernant leur faisabilité, nous proposons le type de projet qui répond le mieux aux demandes (projet collaboratif de recherche, utilisation par le demandeur d’un équipement après formation, prestation de service réalisée par le personnel de la plateforme). Nous assurons l’encadrement nécessaire en matière d’hygiène et de sécurité, pour l’accès et l’utilisation des laboratoires et équipements du LICA, en accord avec la réglementation française sur les OGM en vigueur.

Chaque projet accepté donne lieu à l’établissement d’un devis.

La tarification diffère selon le type d’utilisateur :

• Coût marginal (coût d’utilisation des laboratoires/équipements et de la main d’œuvre hors salaire public) pour les utilisateurs académiques.
• Coût complet environné (coût d’utilisation des laboratoires/équipements et de la main d’œuvre hors salaire public + charges de structures) pour les utilisateurs privés.

Le LICA dispose des équipements suivants :

• Un laboratoire de culture in vitro équipé pour la préparation et l’autoclavage des milieux de culture, pour le repiquage sous hotte à flux laminaire et pour l’élevage de plants in vitro dans des chambres de culture.
• Un laboratoire de biologie moléculaire équipé pour le clonage, la microbiologie (hotte bactériologique PSM) et l’extraction d’acides nucléiques.
• Une serre expérimentale de type S2 (150 m²) comportant quatre modules pour l’acclimatation et l’élevage d’arbres. Un grand module (75 m²) d’une hauteur de 5-6m permet un bon développement de la partie aérienne des arbres. Une fosse de 1 mètre de profondeur est également disponible permettant un bon développement des racines.
• Un laboratoire d’histologie équipé pour réaliser des coupes de tissus végétaux, leurs colorations et leurs observations par différentes techniques de microscopie optique. Pour ce faire, le laboratoire dispose d’un microtome rotatif LEICA RM2155 et d’un vibratome Thermo HM 650. Le laboratoire est également équipé :
  • d’un stéréo-microscope en fluorescence Leica qui permet la détection in vivo de protéines fluorescentes de type GFP
  • d’un microscope inversé Olympus pour les observations de cultures cellulaires ou de  coupes tissulaires en lumière transmise et en épifluorescence
  • d’un microscope confocal Zeiss pour la réalisation de coupes optiques et l’acquisition d’images en fluorescences multiples.
• Un laboratoire de spectroscopie infra-rouge régulé en hygrométrie et température équipé :
  • d’un spectromètre infra-rouge permettant d’acquérir des spectres en proche (NIR) et moyen infra-rouge (MIR, FT-MIR, ATR-FT-MIR).
  • d’un imageur couplé au spectromètre permettant de réaliser des images infrarouges haute résolution en proche et moyen infrarouge.